Pembelajaran anatomi organ dalam manusia pada pendidikan keperawatan sering menghadapi kendala karena materi bersifat abstrak dan sulit divisualisasikan melalui media konvensional seperti teks dan gambar dua dimensi. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan media pembelajaran multimedia interaktif berbasis animasi 3D menggunakan metode ADDIE (Analysis, Design, Development, Implementation, Evaluation). Aplikasi dikembangkan menggunakan Blender untuk pembuatan objek dan animasi 3D serta Unity 3D sebagai platform utama aplikasi berbasis desktop. Media pembelajaran ini menyajikan visualisasi struktur dan fungsi organ dalam manusia, dilengkapi dengan simulasi dampak kebiasaan tidak sehat seperti merokok, konsumsi junk food, alkohol, narkoba, dan kurang tidur. Hasil penelitian dibuktikan dengan melakukan pengujian pretest dan post test dengan mendapatkan rata-rata skor sebesar 25,94% (18,43 poin) yang menunjukkan bahwa media pembelajaran yang dikembangkan mendapatkan peningkatan dan berhasil, pengujian blackbox testing juga dilakukan untuk memastikan bahwa berfungsi secara optimal tanpa adanya error. Validasi oleh ahli materi mendapatkan skor 100% dan ahli multimedia menunjukkan bahwa konten dan tampilan aplikasi berada pada kategori layak digunakan sebagai media pembelajaran. Selain itu, hasil usability testing menggunakan skala Likert mendapatkan skor 4,91 yang di kategorikan “ Sangat Baik”. Dengan demikian, media pembelajaran multimedia berbasis animasi 3D ini layak digunakan sebagai media pendukung pembelajaran anatomi organ dalam manusia dan dapat membantu meningkatkan pemahaman serta minat belajar mahasiswa keperawatan.